PCR實(shí)驗(yàn)室是分子診斷的基礎(chǔ),也是進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的必備場所。近些年,分子診斷行業(yè)快速發(fā)展,使得很多IVD從業(yè)者對PCR的認(rèn)識又進(jìn)入到了一個(gè)新的階段,但是基于實(shí)驗(yàn)室的基本知識仍然是非常重要的一環(huán)。
PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)原則
原則上應(yīng)當(dāng)設(shè)置4個(gè)區(qū)域:試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
根據(jù)采用儀器的功能,區(qū)域可適當(dāng)合并。
采用實(shí)時(shí)熒光
PCR儀,擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并;
采用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測為一體的自動(dòng)化分析儀,則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
各區(qū)功能必備物品明細(xì):
1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)(1區(qū))
功能:
貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
必備物品:
2~8℃和-20℃以下冰箱。
混勻器。
微量加樣器(覆蓋0.2-1000µl)
2、標(biāo)本制備區(qū)(2區(qū))
功能:
核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作,應(yīng)符合生物安全二級實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。
必備物品:
2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。
高速離心機(jī)。
混勻器。
水浴箱或加熱模塊。
微量加樣器(覆蓋0.2-1000µl)。
生物安全柜。
3、擴(kuò)增區(qū)(3區(qū))
功能:
cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測。
必備物品:
核酸擴(kuò)增儀(或熒光定量PCR儀)
4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)(4區(qū))
功能:
擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。
必備物品:
雜交儀、電泳儀、測序儀等
微量加樣器(覆蓋0.2-1000µl)
通用物品(4個(gè)區(qū)都有可能需要)
可移動(dòng)紫外燈(近工作臺面)。
消耗品:一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭。
專用工作服和工作鞋(套)。
專用辦公用品。
樣本管架(2區(qū))
防爆夾(2區(qū))
PCR管架(2區(qū)、傳遞窗)
其他物品