pcr技術(shù)發(fā)展歷史

1、1971年：Korana最早提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想。
2、1985年：Mullis等發(fā)明了具有劃時(shí)代意義的聚合酶鏈反應(yīng),使用的DNA聚合酶是Klenow片段,因?yàn)檫@個(gè)發(fā)現(xiàn), Mullis獲得了1993年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。
3、1988年初：Keohanog改用T4 DNA聚合酶進(jìn)行PCR。
4、1988年：Saiki發(fā)現(xiàn)Taq DNA聚合酶,從此PCR技術(shù)得以廣泛應(yīng)用。
5、1990年：Haase首創(chuàng)原位PCR反應(yīng)。
6、1992年：Higuchi提出aPCR技術(shù)
7、2006年：第三代PCR


pcr之父 Kary Mullis

pcr反應(yīng)基本原理

1、變性
2、退火
3、延伸
4、第二次循環(huán)
3、第三次循環(huán)

pcr反應(yīng)過程

變性——將被復(fù)制的DNA片段在高于其Tm的條件下（94~95℃）加熱，使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的氫鍵斷裂二解螺旋，形成兩條單鏈分子作為擴(kuò)增反應(yīng)的模板，以便與引物結(jié)合。
退火——將反應(yīng)體系的溫度降至寡核苷酸（引物）的熔點(diǎn)溫度以下（40~70℃），以便使引物能與模板DNA序列互補(bǔ)結(jié)合，形成雜交鏈。
延伸——將反應(yīng)體系的溫度升至72℃左右，此時(shí)反應(yīng)體系按照模板鏈的序列以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則以此把dNTP加至引物的3’端，在Taq DNA聚合酶的存在下，雜交鏈不斷延伸，直至形成新的DNA雙鏈。