HPLC 既可以做分析也可以做制備

HPLC 用來純化，上樣量那么小有什么意義？

HPLC 純化上樣量小，這樣分離效果好，就可能得到很純的物質(zhì)，同時配合質(zhì)譜等就何以得到很多單一蛋白的特性包括序列等，這些純度高的組分是用一般的純化方法做不到的。

HPLC 用來分析檢測，怎樣指導(dǎo)以后的分離純化工作呢？

HPLC 重現(xiàn)性好,定量準(zhǔn)確,所以也可以用于定量和定性,是分析中不可缺少的工具.分析出來后如果這個物質(zhì)很穩(wěn)定，直接線性放大就可以做大規(guī)模的制備，因此摸好了分析的條件也就相應(yīng)有了制備的條件。

利用蔬水性質(zhì)，用反向 HPLC 方法分離的原理？

反相和疏水都是依據(jù)物質(zhì)的極性來純化的，極性越強先出來，極性越弱越后出，洗脫疏水是高鹽吸附低鹽洗脫，反像是極性強的流動相吸附，降低它的極性洗脫，選擇主要是依據(jù)填料的特點以及樣品本身的特點而改變的。
疏水的填料疏水集團密度只是反相的 10%左右,其他的都是親水的,而反相正好相反,它的表面全是疏水基團,因此疏水一般需要高鹽吸附,低鹽洗脫,反相一般用甲醇水乙睛水吸附,洗脫是逐漸增加有機溶劑的量.由于以上的原因,疏水比反相要溫和,蛋白一般不變性,由于填料多為瓊脂糖凝膠,所以蛋白回收率高,而反相適合做分析多,也有做制備的,那也是一些分子量相對小的多肽,反相的回收率也低, 因為硅膠雜吸附的原因.疏水色譜是純化蛋白的另一個有力的工具.