樣品如何處理其初步提純（如何洗去蛋白的自身帶）？

（1）上清樣品處理，要加入去污劑，蛋白酶抑制劑，還原劑，還要注意溫度及超聲破碎的參數(shù)。
（2）去大腸桿菌自身帶（兩條 30KD-40KD）可用非變性緩沖液超聲懸?。尤肴ス竸?，離心 6000r/min，30min，10℃。（若效果不夠可繼續(xù)上述步驟）。
（3）大腸桿菌包涵體的洗滌，可用包涵體洗液多洗幾遍，也可用 1M/2M/4M/8M 尿素逐步溶解，可選取其中純度最佳的。
（4）可用硫酸銨沉淀法，初步提純。

蛋白掛在柱子上洗脫不下來，怎么解決？

（1）洗脫條件太溫和（組氨酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)仍然結(jié)合在柱上，結(jié)合力較強(qiáng)） 策略：用增加咪唑的梯度洗脫或降低pH 來找出最佳的洗脫條件。
（2）降低 PH 的方法洗脫的，因?yàn)槿?PH 低于 3.5，會(huì)導(dǎo)致鎳離子脫落策略：改變洗脫辦法，咪唑競爭性洗脫。
（3）蛋白已沉淀在柱上策略：減少上樣量和孵育的時(shí)間，試用去污劑（1%-2%Tritonx-100）或改變 NaCl 的濃度，或在變性條件下洗脫（用 8M 脲，或 6M 鹽酸胍），最終也可在洗脫 Buffer 中加入 2mMDTT 或者 0.5%肌氨酸鈉進(jìn)行洗脫。
（4）非特異性疏水或其他相互反應(yīng)策略：加非離子去污劑到洗脫緩沖液（如，2%Triton X-100）或增加 NaCl 的濃度。

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