鎳柱堵了怎么辦？

（1）柱子發(fā)生堵塞，可能是樣品中細胞碎片或其他雜顆粒所致，所以樣品一定要高速離心。
（2）上清純化時，蛋白發(fā)生變性，有絮狀物產(chǎn)生，趕緊加入 1-2mM DTT （上清樣品處理要在冰浴中進行），還不行加尿素變性，使其在變形環(huán)境下。
（3）樣品處理時的料液比不要太小，否則黏度大，或者導(dǎo)致蛋白析出或變性，料液比要在 1/10-1/15 之間較適宜。

鎳柱使用中出現(xiàn)棕色是怎么回事?

出現(xiàn)這樣的情況，主要是緩沖液中 DTT 的影響，DTT 會對鎳柱的顏色和純化效率有很大的影響，在堿性的緩沖液條件下鎳離子會被 DTT 還原生成棕色的沉淀，所以所有鎳柱的生產(chǎn)商都強調(diào)要盡量避免 DTT 的參與（一般的鎳柱耐受小于 5mM DTT，推薦緩沖液中不要超 2mM DTT）。

純化過程中，蛋白出現(xiàn)了渾濁，怎么辦？

（1）出現(xiàn)渾濁，說明蛋白處在不穩(wěn)定的環(huán)境中或者自身就不穩(wěn)定，所以要檢查緩沖體系是否正確，環(huán)境是否低溫，或在緩沖液中加入還原劑 DTT。
（2）加入肌氨酸鈉，迅速使蛋白變性，消除渾濁現(xiàn)象。

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