抗體純化基本原理：

protein A和proteiin G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合。Protein A和proteinG 作為配基可以被偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，當(dāng)抗血清從中流過(guò)時(shí)，特異性的IgG就與配基結(jié)合，其他雜蛋白則穿流而過(guò)。因兩種蛋白純化抗體時(shí)對(duì)不同宿主的抗體的結(jié)合能力不同，我們需要具體情況具體對(duì)待，分別選擇protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G組合。一般推薦小鼠單抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，豬的多克隆抗體用protein A純化，而小鼠單抗IgG1, 大鼠單抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗體則選擇用protein G純化。

具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1、稱取經(jīng)CNBr活化了的sepharose 4B 0.5g, 溶于2mM的HCL溶液中，4攝氏度過(guò)夜，使其充分溶脹。
2、將溶脹好了的sepharose 4B預(yù)裝于層析柱中，用10倍體積的2mM HCL溶液洗滌三次后用0.1 M NaHCO3 溶液對(duì)柱子進(jìn)行平衡
3、將5mg protein A/G 溶于0.1 M NaHCO3溶液中，加入步驟b中已平衡好的柱子，置于搖床上輕輕混合2到8攝氏度過(guò)夜或者室溫2到4小時(shí)
4、用0.1 M NaHCO3 溶液洗滌c中已經(jīng)結(jié)合了蛋白的柱子三次。事先留取已經(jīng)結(jié)合過(guò)了的上清，用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定結(jié)合后上清中蛋白的濃度，以確定結(jié)合率。
5、用0.01M tris base 平衡柱子三次，加入0.5% BSA封閉sepharose 4B上未結(jié)合的位點(diǎn)，置于搖床上在室溫反應(yīng)2到4小時(shí)。
6、用0.01M tris base 平衡柱子3次。
7、加入要純化的經(jīng)預(yù)處理了的抗血清5ml，置于搖床上在室溫反應(yīng)2到4小時(shí).
8、用0.01M tris base 洗滌柱子三次以上，洗掉未結(jié)合的雜蛋白
9、用9ml 0.1 M PH 2.5甘氨酸洗脫結(jié)合在柱子上的抗體
10、將1ml 1M NaHCO3溶液加入EP管中中和步驟i中洗脫的抗體
11、將步驟j中的抗體溶液裝入透析袋經(jīng)PEG20000或者蔗糖濃縮至2ml后于0.01MPBS中透析4次以上，每次換液間隔時(shí)間為1小時(shí)以上。
12、將透析好了的抗體用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定其在波長(zhǎng)280nm處的吸光值，用吸光值除以1.35即為所測(cè)抗體的濃度
13、將所純化的抗體加入30%-50%的甘油置于-20攝氏度或者-80攝氏度即可長(zhǎng)期保存。