IgM抗體簡介

IgM的研究始于1937年，即用肺炎球菌多糖超免疫的馬產(chǎn)生的抗體比典型的兔γ-球蛋白大得多，分子量為990,000道爾頓。IgM是最大的抗體，它是第一個出現(xiàn)在對抗原初始暴露的反應(yīng)中的抗體。在已經(jīng)研究過的人和其他哺乳動物的情況下，產(chǎn)生抗體產(chǎn)生的漿母細(xì)胞的脾是特異性IgM產(chǎn)生的主要部位。基于IgM的研究，診斷應(yīng)用，免疫治療都廣泛應(yīng)用并快速發(fā)展。

IgM抗體的純化方法

IgM有很強(qiáng)的疏水性，可以通過硫酸氨鹽析或者疏水層析Butyl Focurose 4FF層析純化

IgM的分子量很大，比IgG及其它低分子蛋白分子量要大很多，可以凝膠過濾層析 Focurose 6FF層析純化

IgM也可以用PEG萃取方法純化

IgM抗體最常用的純化方法是用IgM Focurose 6HP親和層析純化。

IgM抗體純化工藝

分級鹽析（略）

鹽析樣品的溶解：用0.02M的PB(pH 7.5）溶解含有IgM的硫酸氨沉淀，使溶解后的樣品中硫酸氨的含量在0.8M左右，不同來源的IgM可以適當(dāng)調(diào)整。

親和層析：

基質(zhì)	高度交聯(lián)6%的瓊脂糖
粒徑范圍	25-45µm
平均粒徑	37µm
結(jié)合載量	≈5mg(人IgM)/ml(介質(zhì))
pH穩(wěn)定性	3-11(長期) 2-13(短期)
化學(xué)穩(wěn)定性	所有常用緩沖溶液中穩(wěn)定 30%異丙醇、70%乙醇、1M醋酸、0.1M NaOH
流速	300cm/h
操作壓力	≤0.3MPa
貯存溶液	20%乙醇
貯存溫度	4-8℃

IgM Focurose 6HP技術(shù)參數(shù)

層析填料：IgM Focurose 6HP

平衡緩沖液：0.02M PB 、0.8M (NH4)2SO4 ,pH7.5 （平衡緩沖液也可用0.5 M 硫酸鉀代替硫酸氨，不同來源IgM緩沖液的鹽離子及pH可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整優(yōu)化）

洗脫緩沖液：0.02M PB pH7.5（可以適當(dāng)調(diào)整優(yōu)化）

純化過程

流速：50cm/h；

平衡：平衡10CV（CV指柱體積，下同）；

上樣：上樣流速可根據(jù)試劑調(diào)整；

淋洗：用平衡緩沖液洗10CV；

洗脫：可用平衡緩沖液加洗脫緩沖液連續(xù)梯度洗脫

備注：結(jié)合效率低，可適當(dāng)?shù)膬?yōu)化上樣緩沖液，降低上樣流速。洗脫時線性梯度拉的緩一些利于更好的分離。

條條大路通羅馬，到底怎么樣的純化工藝路線是最佳路線呢？沒有捷徑，這還需要根據(jù)IgM的用途及來源，特性進(jìn)行實驗驗證，上面只是宏觀的純化思路，請您指正！