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如何區(qū)分RT-PCR、QPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR?

時間:2020-06-02 20:39 點擊次數(shù): 更多 pcr技術(shù)原理 文章
 
有沒有被PCR、RT-PCR、qPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR這一堆縮寫弄的暈頭轉(zhuǎn)向的經(jīng)歷?剛開始接觸這些PCR縮寫時,真的傻傻分不清。

什么是 RT-PCR?

RT-PCR就是反轉(zhuǎn)錄PCR,是PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補DNA,再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。

那什么是 qPCR、Real-time-PCR?

其實 Real-time-PCR和 qPCR是一碼事,都是實時定量PCR,指的是PCR過程中每個循環(huán)都有數(shù)據(jù)的實時記錄,因此可以對起始模板數(shù)量進行精確的分析。

那Real-time PCR、RT-PCR 呢?

Real-time PCR ≠ RT-PCR
雖然Real-time PCR(實時熒光定量PCR)和 RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄PCR)看起來都可以縮寫為RT-PCR,但是,國際上的約定俗成的是:RT-PCR特指反轉(zhuǎn)錄PCR,而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR(實時熒光定量PCR)。
兩者英文全稱是完全不同的,Real-time PCR的全稱為quantitative real-time PCR,RT-PCR的全稱為reverse transcription PCR。

什么是 real-time RT-PCR或RT-qPCR?

real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的組合,是說將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后再作為模板進行實時熒光PCR分析,因為RT-PCR是可以定性的,但不能進行定量檢測的。
所以不難理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是結(jié)合了熒光定量技術(shù)的反轉(zhuǎn)錄PCR:先從 RNA 反轉(zhuǎn)錄得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR進行定量分析(qPCR)。
所以,實時熒光定量PCR,它不僅可以用cDNA作為模板,也可以用基因組DNA等作為模板。

總結(jié)一下
RT-PCR=反轉(zhuǎn)錄PCR
Real-time PCR=qPCR 實時熒光定量PCR
Real-time RT-PCR=RT+qPCR
明白了嗎?

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