克隆PCR產(chǎn)物的最優(yōu)條件是什么？

最佳插入片段：載體比需實(shí)驗(yàn)確定。1：1（插入片段：載體）常為最佳比，摩爾數(shù)比1：8或8：1也行。
應(yīng)測(cè)定比值范圍。連接用5ul 2X連接液,50ng質(zhì)粒DNA,1Weiss單位的T4連接酶，插入片段共10ul。
室溫保溫1小時(shí)，或4℃過夜。
在這2種溫度下，缺T-凸出端的載體會(huì)自連，產(chǎn)生藍(lán)斑。室溫保溫1小時(shí)能滿足大多數(shù)克隆要求，為提高連接效率，需4℃過夜。

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