對(duì)于IgG的純化，相信好多小伙伴們都不陌生，大部分情況下我們都會(huì)選擇使用Protein A或Protein G親和層析。因?yàn)樗鼈儗?duì)于IgG具有特異性的親和作用，而對(duì)于其他雜蛋白沒(méi)有或者只有很弱的結(jié)合，具有極高的選擇性。通常，僅僅憑借Protein A或Protein G一步親和層析就可使我們的蛋白達(dá)到90%的純度。那么做好第一步很關(guān)鍵，我們是選擇Protein A還是Protein G呢？它們有啥不一樣？

Protein A

Protein A是金黃色葡萄球菌表面的蛋白，分子量42kDa，有5個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域可以結(jié)合IgG的Fc片段，具有很強(qiáng)的特異性親和力，每個(gè)Protein A分子至少可以結(jié)合兩個(gè)IgG分子。同時(shí)，IgA、IgM或者IgE也有可能和Protein A結(jié)合。經(jīng)過(guò)科研人員的不斷努力，Protein A已經(jīng)形成一個(gè)龐大家族：
★nProtein A：天然Protein A，無(wú)動(dòng)物來(lái)源組分，載量約30mg人IgG/ml。
★rProtein A：重組Protein A ，C-端新增一個(gè)Cysteine，可以單一位點(diǎn)定向偶聯(lián)于瓊脂糖基架上，降低與抗體接觸的空間位阻，提高了載量，約50mg人IgG/ml。
★ rmp Protein A：重組Protein A，多點(diǎn)結(jié)合于瓊脂糖基架上，有效減少Protein A脫落，載量約30mg人IgG/ml。
★ MabSelect：基于高流速的Capto基架的高載量的rProtein A填料，載量約30mg人IgG/ml。
★ MabSelect  Xtra：更小粒徑更多孔，更高動(dòng)態(tài)載量，載量約40mg人IgG/ml。
★ MabSelect SuRe：偶聯(lián)有耐堿的rProtein A，可以用0.1-0.5M NaOH清洗，載量約30mg人IgG/ml。
★ MabSelect SuRe LX：耐堿清洗，超高動(dòng)態(tài)載量，載量約60mg人IgG/ml。

Protein G

Protein G并不是我們熟知的G Protein（細(xì)胞表面G蛋白）， 而是G族鏈球菌的細(xì)胞表面蛋白，分子量25kDa，和IgG的Fc區(qū)域特異性結(jié)合，還能以低親力與Fab區(qū)域特異性的結(jié)合，但不與IgA和IgM結(jié)合。相比于Protein A，Protein G可以更廣泛、更強(qiáng)地、與更多類(lèi)型的IgG結(jié)合，但是載量卻較低，約20mg人IgG/ml。 Protein A 和 Protein G雖然名字像，但對(duì)于不同物種和亞型的IgG的親和力卻有很大不同，這也是選擇時(shí)的重要依據(jù)之一：