蛋白質(zhì)分離純化總體原則

1）純化前對樣品的來源，目的蛋白的理化性質(zhì)及生物活性要做充分了解。
2）純化前明確純化所要達到的目的及目標。
3）根據(jù)所要達到的目的在回收率，純度，成本等之間合理取舍次要指標，把主要指標放在第一位。如科學研究，鑒定蛋白結(jié)構(gòu)，純度就是第一指標，回收率等次之。

蛋白質(zhì)分離純化過程

    純化每一步都充分利用目標蛋白和雜質(zhì)成分理化性質(zhì)差異。如大腸桿菌菌體蛋白大多是一些低分子量蛋白（<50000Da），且酸性蛋白較多。

蛋白純化方法的選擇

        根據(jù)蛋白理化特性選擇分離材料和純化方法，避免利用相同技術進行多次純化；對純化方法，及各種方法的適用性，各種方法的差異性做充分的了解。如排阻層析不適合用于分子量相差不到10%的樣品的分離。

蛋白質(zhì)分離純化不同階段突出重點

1）純化早期盡量減少樣品處理體積，方便后續(xù)純化；如目的蛋白在發(fā)酵液中，前期用鹽析，膜過濾等方式去除大量的水分和小分子雜質(zhì)。
2）純化后期由于樣品處理量和雜質(zhì)量都已減少，可使用價格昂貴的高效分離材料進行精制，利于降低分離純化成本，提高產(chǎn)品收率和純度，實現(xiàn)工藝性價比最優(yōu)化。

層析方法	親和層析	凝膠過濾層析	離子交換層析	疏水層析
分離機制	特異性親和	大小	電荷	疏水性
選擇性	非常高	中等	高	高→中等
載量	高	低	高	高
純化速度	中等	中等→低	高	高
生物相容性	好	非常好	好	中等→好
目標蛋白的得率	高	高	高	中等→高
捕獲濃縮階段	+++	+	+++	+++
中間純化階段	+++	+	+++	+++
精致純化階段	++	+++	+++	+

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