目前動物源性病毒感染人類的風險性極高，潛在的醫(yī)源性感染問題變得日益突出。因此由人的、動物的組織或者體液提取的制品、動物源性單克隆抗體及真核表達的重組制品，生產(chǎn)工藝中一定要包含能有效地去除/滅活這些潛在病毒工藝步驟，以確保制品的生物安全性。

根據(jù)《藥品注冊管理辦法》的要求，無論是在國內(nèi)申報還是國外申報由人的、動物的組織或者體液提取的制品、動物源性單克隆抗體及真核細胞表達的重組制品，需增加病毒滅活工藝驗證資料。

現(xiàn)在國外申報或者中外雙報的生物制品企業(yè)越來越多，國內(nèi)申報與國外申報遵循的指導原則是不一樣的。國內(nèi)主要以《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術(shù)審評一般原則》及《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導原則》為主。國外以《Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin》、《Points to consider in the characterization of cell lines used to produce biologicals》、《Guideline on Virus Safety Evaluation of biotechnological Investigational Medicinal Products》為主，今天就跟大家分享一下國內(nèi)外申報的差異。

國內(nèi)外申報差異主要有三個方面：

1. 指示病毒的差異

國內(nèi)的指導原則要求比較詳細具體，明確指出了病毒的類型。規(guī)則要求：“一個典型的驗證研究所選擇的病毒，至少應包括單鏈和雙鏈的RNA及DNA、脂包膜和非脂包膜、強和弱抵抗力、大和小顆粒等病毒；去除/滅活技術(shù)方面可根據(jù)采用的具體方法選擇恰當?shù)倪m宜病毒，例如SD法可選用脂包膜病毒，膜過濾法可選用粒徑小的病毒，加熱法可選用脂包膜和非脂包膜病毒，低pH孵放法可選用對理化因素比較耐受的指示病毒等。”

當然，選擇指示病毒的核心需要以生物組織原材料、種子細胞或組織原材料勻漿、培養(yǎng)細胞結(jié)束時的混懸液中可能出現(xiàn)的污染病毒為主，結(jié)合能夠用于評價驗證效果的指示病毒的可獲得性與相關(guān)培養(yǎng)試驗條件進行合理選擇。

國外規(guī)則沒有寫明病毒的具體要求，僅要求盡可能選擇污染產(chǎn)品最相似的病毒進行驗證，即特異性指示病毒；同時需要關(guān)注理化性質(zhì)較寬的非特異性病毒。沒有像CFDA中那樣詳細描述病毒的特點。

2. 工藝選擇上的差異

國內(nèi)IND申報時，一般選擇低pH和膜過濾這兩個工藝。國外進行申報時，除了選擇低pH和膜過濾，還需進行層析工藝。

低pH處理法屬于化學病毒去除/滅活的一種，原理是利用病毒表面的抗原在低pH值的條件下，電荷發(fā)生改變，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)也發(fā)生不可逆的改變，從而使病毒喪失與細胞受體結(jié)合的能力，阻止其侵染細胞。常用于單克隆抗體的病毒滅活工藝。一般選擇pH 3-3.7處理2~24h。

膜過濾工藝是一種物理病毒去除/滅活方法，原理是選擇孔徑比病毒有效直徑小的濾膜，對產(chǎn)品進行處理，將病毒與產(chǎn)品分離。膜過濾不能單獨使用，需要與其他方法聯(lián)合使用。在病毒驗證時，需要綜合考慮蛋白溶液的濃度、濾速、壓力和過濾量等重要參數(shù)。

層析法最常用的是親和層析和離子交換層析。層析法是目前常用的樣品不同組分分離技術(shù)，利用各組分與固定相親和力的差異或相互作用不同的原理，實現(xiàn)病毒與樣品分離的目的。

3. 在工藝重復性方面的差異

國內(nèi)的指導原則雖然沒有硬性的規(guī)定，但通常需要做三個批次。在國外的指導原則中，明確指出至少分別做兩次獨立的研究來證實清除的可重復性，因此一般是一批樣品重復兩次。

病毒去除/滅活工藝驗證流程涉及多個方面，比如指示病毒的選擇，驗證方案的選取，清除效果的判定，以及統(tǒng)計處理分析等。為了幫助新藥申報人員選擇合適的指示病毒，合理有效的開展病毒去除/滅活驗證工藝，義翹神州特舉辦了 “病毒去除/滅活的方法及工藝的選擇”的在線課堂。